Cylindres de clonage de laboratoire : comment isoler des colonies cellulaires individuelles ?

Indispensables en culture cellulaire, les cylindres de clonage permettent d’isoler une colonie adhérente pour établir une lignée monoclonale après transfection, CRISPR, fusion d’hybridomes ou sélection antibiotique. Posés autour d’un clone, ils délimitent une zone étanche pour l’action d’un dissociant (trypsine/EDTA) et un transfert sans contamination croisée. Disponibles en verre borosilicaté réutilisable ou en plastique stérile prêt à l’emploi, avec diamètres et bords adaptés, ils sécurisent les étapes critiques et fluidifient votre flux de travail en paillasse.

Quels sont les différents types de cylindres de clonage ?

Un cylindre de clonage (ou anneau de clonage) se dépose autour d’une colonie adhérente pour l’isoler du reste du tapis cellulaire. Une fine couche de graisse silicone stérile (ou une base adhésive selon les modèles) crée l’étanchéité, on ajoute le dissociant, puis on récupère la colonie en suspension pour réensemencer un puits propre.

Deux familles dominent :
• Verre borosilicaté : robuste, réutilisable, autoclavable, bords polis ou biseautés pour une meilleure assise. Excellente résistance chimique et visibilité.
• Plastique stérile (souvent polystyrène) : à usage unique, prêt à l’emploi, limite les contaminations croisées et gagne du temps. Versions adhésives disponibles pour éviter la graisse.

Critères de choix :
• Diamètre interne (typiquement 3 à 10 mm) adapté à la taille de la colonie et à la géométrie de la boîte ou de la plaque.
• Hauteur et finiton du bord (plat ou biseauté) pour optimiser l’étanchéité et l’accès pipette.
• Stérilité, conditionnement (individuel, emballage groupé), certifications (sans DNase/RNase, non pyrogène).
• Compatibilité avec les agents de dissociation et les surfaces traitées culture cellulaire.
• Impact environnemental : verre réutilisable (moins de déchets), plastique stérile pour le zéro-retraitement et la traçabilité.

Type	Principe	Applications
Verre borosilicaté	Réutilisable, autoclavable, bords polis	Clonage intensif, protocoles exigeants, solvants
Plastique stérile	Usage unique, prêt à l’emploi	Séries rapides, GMP-like, risque contaminant
Plastique adhésif	Base adhésive, sans graisse	Surfaces délicates, gain de temps, formation

Dans quels domaines utilise-t-on un cylindre de clonage ?

Les sciences de la vie et la biotechnologie l’emploient pour obtenir des lignées monoclonales stables après transfection ou édition génomique. En pharmaceutique, il sert à la sélection de clones producteurs (hybridomes, cellules CHO) pour la bioproduction d’anticorps. En recherche académique et en CRO, il accélère la sélection de clones CRISPR, l’isolement de sous-populations et la standardisation d’essais. En virologie, il aide à prélever des plaques isolées. En cosmétique et toxicologie, il facilite la création de cultures homogènes pour des tests reproductibles. Certains laboratoires de contrôle qualité l’utilisent pour stabiliser des lignées cellulaires de référence et fiabiliser les bioessais.

Les différents cylindres de clonage disponibles

Questions fréquentes sur les cylindres de clonage

Comment choisir le bon diamètre de cylindre ?
Visez un diamètre 1 à 2 mm plus grand que la colonie pour garantir l’étanchéité et laisser passer l’embout de pipette sans cisailler le tapis cellulaire.

Verre ou plastique : que privilégier ?
Le verre est durable, autoclavable et chimiquement inerte. Le plastique stérile gagne du temps, limite les contaminations et convient aux lots à usage unique.

Comment assurer une bonne étanchéité ?
Déposez un fin anneau de graisse silicone stérile, posez sans appuyer trop fort, chassez les bulles. Les versions adhésives évitent la graisse sur surfaces sensibles.

Puis-je les utiliser avec autre chose que la trypsine ?
Oui, EDTA, Accutase ou enzymes douces conviennent selon la lignée. Vérifiez la compatibilité avec la surface de culture et la cinétique de détachement.

Comment stériliser un cylindre en verre ?
Nettoyez, rincez abondamment, puis autoclavez. Le verre borosilicaté supporte aussi une flamme rapide. Évitez les abrasifs qui rayent et retiennent des contaminants.

Les modèles plastiques sont-ils réutilisables ?
Non, ils sont généralement à usage unique et fournis stériles. La réutilisation augmente le risque de contamination et de déformation au nettoyage.

Y a-t-il un risque pour les cellules avec les adhésifs ?
Les modèles de qualité utilisent des adhésifs à faible cytotoxicité. Laissez s’adsorber quelques secondes et évitez le glissement pour limiter le stress cellulaire.